安徽省首家科創(chuàng)板上市企業(yè) 股票代碼： 688600

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方案概述

前言：

藤黃健骨丸是由熟地黃、鹿銜草、骨碎補(bǔ)（燙）、淫羊藿、雞血藤、肉蓯蓉、萊菔子（炒）等七味中藥組成的經(jīng)典復(fù)方制劑，其組方以補(bǔ)腎為本、治骨為標(biāo)，通過補(bǔ)益肝腎、活血通絡(luò)實(shí)現(xiàn)“補(bǔ)腎、活血、止痛”的核心功效?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究證實(shí)，該藥具有改善血液流變學(xué)、抗炎鎮(zhèn)痛及抗骨質(zhì)增生等作用，臨床廣泛用于肥大性脊椎炎、頸椎病、增生性關(guān)節(jié)炎等骨科疾病的治療。據(jù)最新的《國家藥典委員會(huì)關(guān)于藤黃健骨丸國家藥品標(biāo)準(zhǔn)草案的公示》，新標(biāo)準(zhǔn)草案新增了朝藿定C和淫羊藿苷的高效液相色譜含量測定項(xiàng)，通過檢測藤黃健骨丸中淫羊藿苷（主要活性成分）和朝藿定C（質(zhì)量控制指標(biāo)成分）的含量，可以更精準(zhǔn)地反映藥材質(zhì)量與制劑工藝穩(wěn)定性。

本篇文章參考了最新的《國家藥典委員會(huì)關(guān)于藤黃健骨丸國家藥品標(biāo)準(zhǔn)草案的公示》中修訂的含量測定項(xiàng)下高效液相色譜法色譜條件，采用皖儀科技高效液相色譜儀LC3200系列配置DAD檢測器對藤黃健骨丸樣品中朝藿定C和淫羊藿苷進(jìn)行檢測。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，朝藿定C、淫羊藿苷色譜峰的理論塔板數(shù)均高于10000，滿足實(shí)驗(yàn)分析需求。對照品溶液（30μg/mL）重復(fù)進(jìn)樣6次，朝藿定C的保留時(shí)間RSD值為0.223%，峰面積RSD值為0.243%，淫羊藿苷的保留時(shí)間RSD值為0.219%，峰面積RSD值為0.212%，重復(fù)性較好。朝藿定C檢出限為0.0098μg/mL，定量限為0.0328μg/mL；淫羊藿苷檢出限為0.0088μg/mL，定量限為0.0292μg/mL。取藤黃健骨丸作為測試樣品，根據(jù)對照品溶液朝藿定C和淫羊藿苷標(biāo)準(zhǔn)品色譜峰的保留時(shí)間進(jìn)行定性，對藤黃健骨丸樣品中朝藿定C和淫羊藿苷進(jìn)行檢測。結(jié)果顯示，本品每丸（每丸重3.5 g）含淫羊藿以朝藿定C和淫羊藿苷的總量計(jì)，得4.347 mg，滿足新標(biāo)準(zhǔn)中大于3.0 mg的要求。說明了該方法配備皖儀科技LC3200系列儀器滿足對藤黃健骨丸藥材中朝藿定C和淫羊藿苷含量檢測需求。

關(guān)鍵詞：朝藿定C；淫羊藿苷；高效液相色譜法；DAD檢測器；藤黃健骨丸。

1.實(shí)驗(yàn)方法

1.1 儀器配置

表1 高效液相色譜系統(tǒng)配置清單

序號(hào)	名稱	數(shù)量
1	LC3200系列高效液相色譜儀	1
2	P3210Q 四元低壓梯度泵	1
3	DAD3260 二極管陣列檢測器	1
4	CT3200全溫度柱溫箱	1
5	AS3200全自動(dòng)進(jìn)樣器	1

1.2 實(shí)驗(yàn)材料及輔助設(shè)備

朝藿定C標(biāo)準(zhǔn)品；

淫羊藿苷標(biāo)準(zhǔn)品；

甲醇：色譜純；

乙腈：色譜純；

分析天平；

微孔濾膜：孔徑0.22μm；

超聲波清洗機(jī)。

1.3 測試條件

表2 實(shí)驗(yàn)色譜條件

實(shí)驗(yàn)色譜條件
色譜柱	諾譜Nova Atom SC18色譜柱
流速	1.0mL/min
柱溫	35℃	檢測波長	270nm
進(jìn)樣量	20μL
流動(dòng)相	A：乙腈，B：水，C：甲醇

表3 梯度洗脫程序表

時(shí)間 / min	A / %	B / %	C/ %
0	22	78	0
6	22	78	0
7	27	68	5
21	27	68	5
22	22	78	0
45	22	78	0

1.4 溶液配制

1.4.1 50%甲醇

取50mL甲醇置于100mL容量瓶中，加入水稀釋至刻度，充分混勻，即可。

1.4.2 對照品溶液（30μg/mL）

取淫羊藿苷對照品、朝藿定C對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1mL各含30μg的混合溶液，即可。

2.結(jié)果與討論

2.1系統(tǒng)適用性

圖1 對照品溶液（30μg/mL）色譜圖

表4 系統(tǒng)適用性溶液色譜參數(shù)

化合物名	保留時(shí)間（min）	峰面積	理論塔板數(shù)
朝藿定C	16.774	1545.848	39776
淫羊藿苷	18.308	1981.081	37252

說明：由上述譜圖可見，朝藿定C、淫羊藿苷色譜峰的理論塔板數(shù)均高于10000，滿足實(shí)驗(yàn)分析需求。

2.2 重復(fù)性

圖2 對照品溶液（30μg/mL）重復(fù)性色譜圖

表5 組分朝藿定C的重復(fù)性色譜參數(shù)

序號(hào)	組分	保留時(shí)間	峰面積	理論塔板數(shù)
1	朝藿定C	16.774	1545.848	39776
2		16.724	1543.658	39766
3		16.714	1543.012	39559
4		16.704	1548.749	39715
5		16.674	1549.325	39569
6		16.674	1552.849	39433
平均	N/A	16.711	1547.240	N/A
RSD（%）	N/A	0.223	0.243	N/A

表6 組分淫羊藿苷的重復(fù)性色譜參數(shù)

序號(hào)	組分	保留時(shí)間	峰面積	理論塔板數(shù)
1	淫羊藿苷	18.308	1981.081	37252
2		18.261	1991.110	37103
3		18.248	1987.723	37055
4		18.231	1989.501	37351
5		18.204	1990.819	36937
6		18.201	1993.044	36940
平均	N/A	18.242	1988.880	N/A
RSD（%）	N/A	0.219	0.212	N/A

說明：對照品溶液（30μg/mL）重復(fù)進(jìn)樣6次，朝藿定C的保留時(shí)間RSD值為0.223%，峰面積RSD值為0.243%；淫羊藿苷的保留時(shí)間RSD值為0.219%，峰面積RSD值為0.212%，重復(fù)性較好。

2.3 檢出限

圖3 對照品溶液（1.5μg/mL）色譜圖

表7 對照品溶液（1.5μg/mL）色譜參數(shù)

化合物名

保留時(shí)間

峰面積

理論塔板數(shù)

信噪比

檢出限

（μg/mL）

定量限

（μg/mL）

朝藿定C

16.648

71.024

39572

457.066

0.0098

0.0328

淫羊藿苷

18.171

89.031

37354

514.078

0.0088

0.0292

說明：以信噪比（S/N）為3確定檢出限（LOD），朝藿定C檢出限為0.0098μg/mL，淫羊藿苷檢出限為0.0088μg/mL。以信噪比（S/N）為10確定定量限（LOQ），朝藿定C定量限為0.0328μg/mL，淫羊藿苷定量限為0.0292μg/mL。

2.4 樣品測試

取藤黃健骨丸樣品適量，剪碎，混勻，取約1g，精密稱定，置乳缽中，用50%甲醇 45 mL分次研磨，轉(zhuǎn)移至 50 mL量瓶中，超聲處理（功率500W，頻率40kHZ）50分鐘，放冷，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。精密吸取供試品溶液20μl，注入液相色譜儀，測定。

圖4 藤黃健骨丸樣品色譜圖

表8 藤黃健骨丸樣品中朝藿定C、淫羊藿苷組分色譜峰色譜參數(shù)

化合物名	保留時(shí)間	峰面積	理論塔板數(shù)	濃度（μg/mL）	以每丸計(jì)總量（mg）
朝藿定C	16.658	683.560	40047	13.27	4.35
淫羊藿苷	18.178	764.010	37796	11.57	4.35

說明：根據(jù)對照品溶液朝藿定C和淫羊藿苷標(biāo)準(zhǔn)品色譜峰的保留時(shí)間進(jìn)行定性，對藤黃健骨丸樣品中朝藿定C和淫羊藿苷進(jìn)行檢測。結(jié)果顯示，本品每丸（每丸重3.5 g）含淫羊藿以朝藿定C和淫羊藿苷的總量計(jì)得4.35 mg，滿足新標(biāo)準(zhǔn)中大于 3.0 mg的要求。

2.5 注意事項(xiàng)

在制備相關(guān)溶液時(shí)需要注意佩戴好實(shí)驗(yàn)室防護(hù)用品。

3.結(jié)論

本篇文章參考了最新的《國家藥典委員會(huì)關(guān)于藤黃健骨丸國家藥品標(biāo)準(zhǔn)草案的公示》中修訂的含量測定項(xiàng)下高效液相色譜法色譜條件，采用皖儀科技高效液相色譜儀LC3200系列配置DAD檢測器對藤黃健骨丸樣品中朝藿定C和淫羊藿苷進(jìn)行檢測。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，朝藿定C、淫羊藿苷色譜峰的理論塔板數(shù)均高于10000，滿足實(shí)驗(yàn)分析需求。對照品溶液（30μg/mL）重復(fù)進(jìn)樣6次，朝藿定C的保留時(shí)間RSD值為0.223%，峰面積RSD值為0.243%；淫羊藿苷的保留時(shí)間RSD值為0.219%，峰面積RSD值為0.212%，重復(fù)性較好。朝藿定C檢出限為0.0098μg/mL，定量限為0.0328μg/mL；淫羊藿苷檢出限為0.0088μg/mL，定量限為0.0292μg/mL。取藤黃健骨丸作為測試樣品，根據(jù)對照品溶液朝藿定C和淫羊藿苷標(biāo)準(zhǔn)品色譜峰的保留時(shí)間進(jìn)行定性，對藤黃健骨丸樣品中朝藿定C和淫羊藿苷進(jìn)行檢測。結(jié)果顯示，本品每丸（每丸重3.5 g）含淫羊藿以朝藿定C和淫羊藿苷的總量計(jì)，得4.35 mg，滿足新標(biāo)準(zhǔn)中大于 3.0 mg的要求。說明了該方法配備皖儀科技LC3200系列儀器滿足對藤黃健骨丸藥材中朝藿定C和淫羊藿苷含量檢測需求。