方案概述

前言：

山梨酸（Sorbic acid），化學(xué)名稱為2,4-己二烯酸，是是一種國際公認(rèn)的高效、低毒酸性防腐劑。它最初于1859年由德國化學(xué)家赫爾曼·馮·霍夫曼（Hermann von Hofmann）從花楸樹的未成熟漿果中分離出來，因此得名。山梨酸及其鉀鹽（山梨酸鉀）是國際上公認(rèn)的高效、低毒的防腐劑，廣泛應(yīng)用于食品、飲料、化妝品及飼料等領(lǐng)域，用于抑制霉菌、酵母菌和需氧性細(xì)菌的生長，從而延長產(chǎn)品保質(zhì)期。中國《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》）對(duì)山梨酸的使用范圍和最大使用量有明確規(guī)定。例如，在面包、糕點(diǎn)中最大使用量為1.0 g/kg，在葡萄酒中為0.2 g/kg。美國FDA將其列為“一般認(rèn)為安全”（GRAS）物質(zhì)。盡管在正常使用范圍內(nèi)山梨酸是安全的，但過量攝入可能會(huì)對(duì)人體造成一定負(fù)擔(dān)，長期大量攝入可能導(dǎo)致腸胃不適或加重肝腎代謝負(fù)擔(dān)。對(duì)山梨酸過敏的人群可能會(huì)出現(xiàn)皮膚刺激或呼吸道不適。

本次實(shí)驗(yàn)參照GB 5009.28-2016 《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測定》采用皖儀科技高效液相色譜儀LC3400系列配置紫外檢測器進(jìn)行測定某碳酸飲料中的山梨酸含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，3.73mg/L標(biāo)準(zhǔn)品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，保留時(shí)間重復(fù)性RSD為0.093%，峰面積重復(fù)性RSD為0.329%，儀器精密度良好；在0.75~74.60mg/L范圍內(nèi)，線性相關(guān)系數(shù)大于0.9997，線性良好；某碳酸飲料中檢出山梨酸，含量為93.77mg/kg，以上數(shù)據(jù)均滿足標(biāo)準(zhǔn)方法對(duì)于儀器的要求。

關(guān)鍵詞：山梨酸；食品添加劑；高效液相色譜法。

1.儀器設(shè)備及試劑

1.1 高效液相色譜配置清單

表1 儀器配置清單表

序號(hào)	名稱	數(shù)量
1	LC3400液相色譜系統(tǒng)	1套
2	P3400B 二元高壓泵	1臺(tái)
3	CT3400 柱溫箱	1臺(tái)
4	AS3400 自動(dòng)進(jìn)樣器	1臺(tái)
5	UV3400 檢測器	1臺(tái)
6	SmartLab CDS 2.0色譜工作站	1套
7	Nova Atom SC18柱 4.6*250mm,5μm	1個(gè)

1.2 試劑及標(biāo)準(zhǔn)品清單

表2 試劑及標(biāo)品清單表

序列	試劑及標(biāo)準(zhǔn)品	純度
1	甲醇	HPLC級(jí)別
2	冰乙酸	AR級(jí)別
3	乙酸銨	AR級(jí)別
4	乙酸鋅	AR級(jí)別
5	亞鐵氰化鉀	AR級(jí)別
6	甲醇中山梨酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000mg/L)	-

1.3 實(shí)驗(yàn)材料及輔助設(shè)備

分析天平；

超聲波清洗機(jī)；

渦旋混合器；

離心機(jī)。

2.實(shí)驗(yàn)方法

2.1 試劑配制

2.1.1 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：精密移取甲醇中山梨酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液1.0mL，置于10mL量瓶中，加入適量的水溶解并定容至刻度，搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（100mg/L）；分別精密移取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液適量置于不同容量瓶中，用水定容至刻度線，搖勻，得到1.00mg/L、2.00mg/L、5.00mg/L、10.00mg/L、20.00mg/L、50.00mg/L和100.00mg/L的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液；

2.1.2 一般性試樣：精密稱取約2g（精確到0.001g）試樣于50mL具塞離心管中，加水約25mL，渦旋混勻，于50°C水浴超聲20min，冷卻至室溫后，加亞鐵氰化鉀溶液2mL和乙酸鋅溶液2mL，混勻，于8000r/min離心5min，將水相轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中。于殘?jiān)屑铀?0mL，渦旋混勻后超聲5min，于8000r/min離心5min，將水相轉(zhuǎn)移到同一50mL容量瓶中，并用水定容至刻度，混勻。取適量上清液過0.22μm濾膜。

3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 標(biāo)準(zhǔn)品與空白譜圖

圖1 空白溶劑與標(biāo)準(zhǔn)品測試疊加色譜圖

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，標(biāo)準(zhǔn)品圖譜中目標(biāo)峰位置無雜質(zhì)干擾，空白溶劑不干擾樣品測定。

3.2 線性與范圍

表3 標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度表

組分名稱	標(biāo)曲1	標(biāo)曲2	標(biāo)曲3	標(biāo)曲4	標(biāo)曲5	標(biāo)曲6	標(biāo)曲7
山梨酸鉀（mg/L）	1.00	2.00	5.00	10.00	20.00	50.00	100.00
山梨酸（mg/L）	0.75	1.49	3.73	7.46	14.90	37.30	74.60

圖2 山梨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，山梨酸濃度在0.75~74.60mg/L范圍內(nèi)，線性相關(guān)系數(shù)大于0.9997，線性良好。

3.3 精密度

圖3 山梨酸標(biāo)準(zhǔn)品(3.73mg/L)測試圖譜重疊圖

表4 山梨酸標(biāo)準(zhǔn)品(3.73mg/L)測試數(shù)據(jù)

化合物名稱	保留時(shí)間(min)	峰面積(mAU*s)
山梨酸	12.513	185.352
	12.515	183.842
	12.523	184.221
	12.529	183.911
	12.538	183.824
	12.541	183.794
平均值	12.526	184.157
SD	0.012	0.606
RSD（%）	0.093	0.329

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，3.73mg/L標(biāo)準(zhǔn)品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，保留時(shí)間重復(fù)性RSD為0.093%，峰面積重復(fù)性RSD為0.329%，儀器精密度良好。

3.4 檢出限

圖4 山梨酸標(biāo)準(zhǔn)品(0.75mg/L)測試譜圖

表5 山梨酸標(biāo)準(zhǔn)品(0.75mg/L)測試數(shù)據(jù)

名稱	保留時(shí)間(min)	峰面積(mAU*s)	信噪比
山梨酸	12.503	37.492	711.205

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，根據(jù)上表山梨酸濃度為0.75mg/L對(duì)照品測試數(shù)據(jù)，3倍信噪比為檢出限計(jì)算可知山梨酸的檢出限理論結(jié)果為3.164μg/L。

3.5 樣品測定

圖5 某碳酸飲料供試品溶液測試圖譜重疊圖

按外標(biāo)法計(jì)算，樣品檢測結(jié)果如下：

樣品名稱	碳酸飲料
樣品中山梨酸上機(jī)濃度（mg/L）	3.754
樣品中山梨酸含量（mg/kg）	93.77

4.結(jié)論

本次實(shí)驗(yàn)參照GB 5009.28-2016 《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測定》采用皖儀科技高效液相色譜儀LC3400系列配置紫外檢測器進(jìn)行測定某碳酸飲料中的山梨酸含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，3.73mg/L標(biāo)準(zhǔn)品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，保留時(shí)間重復(fù)性RSD為0.093%，峰面積重復(fù)性RSD為0.329%，儀器精密度良好；在0.75~74.60mg/L范圍內(nèi)，線性相關(guān)系數(shù)大于0.9997，線性良好；某碳酸飲料中檢出山梨酸，含量為93.77mg/kg，以上數(shù)據(jù)均滿足標(biāo)準(zhǔn)方法對(duì)于儀器的要求。

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